О КОМПАНИИ
ООО "ВиАТорг"
г. Белгород
ПРОДУКЦИЯ
Cосуды Дьюара криобиологические
КОНТАКТЫ
Связь с нами

ПРОДУКЦИЯ
Cосуды криобиологические (Сосуды Дьюара)



КОНТАКТЫ
ООО "ВиАТорг", г. Белгород
Компания "ВиАТорг" официальный представитель Харьковского завода транспортного оборудования в России поставляет криобиологические сосуды (Сосуды Дьюара) по России и странам СНГ.
У нас Вы можете купить Сосуды Дьюара недорого

E-mail:viatorg@yandex.ru

СТАТЬИ
Биотехнологии, принципы и применение


Партнеры
Объявления


Популярное
Интересные факты криобиологии
Транспозоны
Транспозоны и вставочные последовательности — это сходные-элементы в хромосомных ДНК бактерий, ДНК бактериофагов, и плазмид. В опытах с. бактериями транслозоны используются» для получения мутант ...

Основные требования к оборудованию
Прямоугольная выровненная поверхность, на которой предпо­лагается выращивать растения, должна иметь двухсторонний уклон. По всей длине самой низкой ее части проходит канавка-ловушка. Ее выстилают непр ...

Интерферон, Гормон роста, Вакцины
ИнтерферонИнтерфероны — это группа белков, открытых в ходе изучения веществ, вырабатываемых клетками, зараженными вирусами. Они индуцируют как локальные, так и системные противови­русные реакции ...

ЛИТЕРАТУРА
Микробное выщелачивание Brierley С. L. (1978). Bacterial leaching, Grit. Rev. Microbiol., 6, 207—262. Brierley C. L. (1982). Microbiological mining, Scient. Am., 247, 42—51 Fenchel Т., Bla ...

Иммуногистохимия
Меченые антитела могут использоваться для изучения распре­деления антигенов в срезах тканей с помощью как светового, так и электронного микроскопа. При работе по общепринятому «сэндвич-методу» на срез ...

Инокуляция
В прошлом сыроделы полагались на бактерии, имеющиеся в натуральном молоке. Присутствие в нем как нужных, так и не­желательных микробов приводило к тому, что разные партии сыра отличались друг от друга ...

Образование гибридов растений путем слияния протопластов
Протопласты растений можно получить путем механического или ферментативного разрушения клеточных стенок. Такие про­топласты— ценный инструмент в руках генетика растений. Они довольно быстро и эф ...

Отдаленные перспективы
Затраты на организацию многотоннажных биотехнологических производств столь велики, что лишь фирмы, способные осуще­ствлять долгосрочные стратегические программы, могут решить­ся на внедрение такой тех ...

Dewar's flask
Dewar's flask Sir James Dewar © MARY EVANS PICTURE LIBRARY We have all been there. You are at a party where you know almost no one. Eventually you strike up a casual con ...

О мерах безопасности при производстве белка одноклеточных организмов
Микроорганизмы, традиционно используемые в пищевой про­мышленности, часто входят в состав конечного продукта (хотя доля их там обычно невелика). Как показывает опыт, безопас­ность этих продуктов не вы ...

Электроэнергия
Одним из интересных аспектов общей проблемы улавливания солнечной энергии является использование компонентов биоло­гических мембран для генерации электропотенциалов. Таким путем можно попытаться созда ...

Важнейшие гены плазмид
Для биотехнологии особенно интересны те гены плазмид, в ко­торых закодирована способность к фиксации азота и деграда­ции органических соединений, а также факторы вирулентности патогенных бактерий.

Cосуд Дьюара
Сосуд Дьюара (в быту Термос) — сосуд, предназначенный для теплоизоляции содержащегося в нём вещества, а также для безопасной переноски вместе с содержимым.Сосуд Дьюара был изобретён шотландским ...

Оптимизация биокатализатора
Особенности конфигурации биореактора, используемого в био­технологическом процессе, определяются биохимическими и био­физическими свойствами избранного биокатализатора. От его природы зависит также и ...

Занфло (Zanflo)
Полисахарид занфло, получаемый из Erwinia tahitica, облада­ет сходными с ксантаном свойствами; единственное отличие со­стоит в том, что его вязкость претерпевает обратимые термиче­ские изменения (при ...

Диагностика злокачественных новообразований и наблюдение за ними
Известны несколько специфических опухолевых маркеров, ко­торые с успехом используются в диагностике, прогнозировании и выявлении распространения опухолей (т. е. метастазов). Не­которые из них обнаружи ...

Технология рекомбинантных ДНК (Инсулин)
Общеизвестно, что разработка методов изменения генетическо­го аппарата клеток, позволяющих вводить в них чужеродные гены, клонировать их, экспрессировать и получать нужные про­дукты, совершила настоящ ...

Чановое выщелачивание
Чановое выщелачивание используется в горнорудной про­мышленности для извлечения урана, золота, серебра и меди из окисных руд. Медные и урановые руды сильно измельчают и смешивают с растворами серной к ...

Опыты по генетической инженерии in vitro
Для получения разнообразных белков эукариот и вирусов Животных широко применяются бактерии и дрожжи Saccharo-myces cerevisiae. При этом используются самые разные методы, нр наиболее широко, те из дих, ...

Будущий вклад биотехнологии в химическую промышленность
Источником сырья для различных отраслей химической промыш­ленности в обозримом будущем будут нефть и ее производные. Получаемые из них с малыми затратами продукты вряд ли по­требуется производить при ...


Плазмиды
Биотехнологии » Генетика и биотехнология


Многие свойства бактерий, интересные с точки зрения биотех­нологии, кодируются плазмидами. Плазмиды — это кольцевые молекулы ДНК, которые стабильно передаются потомству бак­териальных клеток независимо от хромосомной ДНК- В гене­тической инженерии плазмиды используются для клонирования нужных генов. Мы опишем в этом разделе некоторые важней­шие свойства, плазмид и обсудим те из них, котор,ые особенно ценны для биотехнологии.
Структура и репликация
Мол. масса плазмид составляет от 1*106 до 200*106. Таким об­разом, самые мелкие плазмиды кодируют один-два белка сред­него размера, тогда как более крупные — 300 или более бел­ков. Крупные плазмиды могут кодировать множество ферментов, необходимых для работы целой последовательности биохи­мических реакций, например для превращения толуола в катехол. Плазмиды с мол. массой более 100-106 обнаружены толь­ко у грамотрицательных бактерий, в частности у видов Pseudo-monas и Agrobacterium. Мол. масса плазмид грамположительных бактерий лишь в отдельных случаях превышает 40-106.
В. бактериальных клетках плазмиды существуют в виде кольцевых двухцепочечных ДНК, которые, кроме того, находят­ся в сверхспиральном состоянии. Некоторые из плазмид могут существовать лишь в клетках одного или двух близких видов. К числу плазмид с широким кругом хозяев относятся RP4, R68.45, RK2 и сходные с ними плазмиды, несущие маркер ус­тойчивости к лекарственным препаратам (R-плазмиды), кото­рые принадлежат Р-группе несовместимости (члены одной и той же группы несовместимости не могут сосуществовать в бак­териальной клетке). Эти плазмиды были перенесены во многие виды грамотрицательных бактерий; создается впечатление, что их хозяевами могут быть все штаммы грамотрицательных бак­терий.
Таким образом, R-плазмиды, относящиеся к группе Р, осо­бенно подходят для генетических экспериментов с грамотрицательными бактериями, используемыми в промышленности. При помощи этих плазмид мы можем осуществлять перенос хромо­сомных генов между неродственными видами. Небольшие по размеру производные плазмид RP4 и RK2 используются как векторы для клонирования молекул ДНК, которая затем мо­жет быть перенесена в клетки самых разных видов.
 Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl

Рис. 7.3. Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl. [J. G. Sutcliffe (1979) Cold Spring Harbor Simposia on Quanti­tative Biology, 43, 77—90.] Плазмида pMBl сходна с плазмидой ColEl. Устой­чивость к ампициллину определяется геном В-лактамазы. Указано направление транскрипции этого гена. Стрелками отмечены уникальные сайты расщепления pBR322 некоторыми ферментами.
 
Репликация некоторых типов плазмид тщательно изучена, и нам известны сегодня многие детали этого процесса, особен­но для небольшой плазмиды ColEl. Эта информация помогает при использовании плазмид для клонирования генов. Чаще все­го применяют производные плазмиды pBR322 длиной 4362 пар нуклеотидов, несущей гены устойчивости к пенициллину и тет­рациклину. Эти гены были перенесены из R-плазмид (рис. 7.3) в фрагмент небольшой плазмиды рМВ1, которая близка кочень хорошо изученной небольшой плазмиде ColEl.
Плазмиды pBR322 и ColEl могут реплицироваться в Е. со-U и близких видах Enterobacteriaceae. В бактериальных клет­ках они представлены несколькими копиями; так,для ColEl чис­ло плазмидных копий на хромосому равно примерно 20, а для pBR322 — 40. Это обстоятельство очень важно для клонирова­ния. Чем больше число копий клонированного гена, тем выше выход кодируемого белка. Кроме того, многокопийные плазми­ды не так легко утрачиваются при культивировании. С другой; стороны, малое число копий плазмиды иногда имеет свои пре­имущества, например при клонировании таких генов, продукты которых гибельны для бактериальной клетки в большом коли­честве.
Изучению механизмов контроля репликации и числа копий бактериальных плазмид посвящено множество работ. Было обнаружено, что число копий плазмид примерно одинаково в-клетках, размножающихся с разной скоростью. Из этого сле­дует, что репликация плазмид как-то связана с ростом бакте­рий. Такая координация достигается при участии механизмов,, контролирующих начало репликации. Если уж репликация на­чалась, то она идет с относительно постоянной скоростью при; любом темпе размножения бактерий. При высокой скорости размножения репликация индуцируется чаще в случае много-копийных плазмад, чем малокопийных.
Начало репликации ColEl и pBR322 контролируется неболь­шими молекулами РНК, которые взаимодействуют с особым участком плазмиды, расположенным поблизости от точки ини­циации репликации. Начавшись, репликация идет в одном нап­равлении и заканчивается вблизи точки инициации. Генетики,, стремящиеся максимально увеличить выход белков, кодируе­мых клонированными в pBR322 генами, получали мутанты с модифицированными РНК. У некоторых таких мутантов числа копий плазмиды составляет более 100, что приводит к суще­ственному увеличению выхода продуктов, кодируемых клониро­ванными генами. Интересная особенность репликации ColEl и pBR322 заключается в том, что она полностью обеспечива­ется ферментами хозяина. Сами плазмиды не несут информа­ции, нужной для кодирования ферментов репликации.
Процессы репликации pBR322 и ColEl, с одной стороны, и хромосомы Е. coli — с другой, различаются тем, что первый не подавляется хлорамфениколом, который блокирует синтез бел­ка. В присутствии этого соединения репликация хромосом пре­кращается по завершении уже начавшегося раунда реплика­ции. Такого подавления репликации pBR322 не происходит, и; плазмиды накапливаются в обработанных хлорамфениколом;
клетках, так что в конечном счете они составляют до 50% всей ДНК- При выделении плазмид для увеличения выхода плаз-мидной ДНК к культуре за несколько часов до сбора клеток иногда добавляют хлорамфеникол.
Инициация репликации плазмиды Rl E. coli регулируется белком-репрессором, кодируемым одним из генов R1. Были по­лучены мутантные плазмиды, которые кодируют аномальный репрессор или же имеют несовершенный механизм-регуляции его образования. Некоторые из этих мутантов -т— температуро-чувствительные (репрессор неактивен при 43 °С). При 30 °С репликация идет нормально, и на клетку образуется 1—2 плаз-мидные копии, а при 43 °С репликация инициируется гораздо чаще, так что в клетке накапливается по нескольку сот плаз­мид. Небольшой сегмент R1, содержащий участок начала реп­ликации и связанные с ними регулирующие элементы, был ис­пользован для создания плазмид-векторов, применяемых при клонировании разнообразных генов. -Преимущество таких век­торов заключается в том, что при повышенной температуре с их помощью можно получать множества копий клонируемого гена, а следовательно, и много белка, кодируемого этим геном.



Другие новости по теме:

  • Транспозоны
  • Включение ДНК в плазмидные и фаговые векторы
  • Важнейшие гены плазмид
  • Гибридизация путем скрещивания
  • Опыты по генетической инженерии in vitro


  •  (голосов: 0)

    ООО "ВиАТорг" © 2009
    Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru