О КОМПАНИИ
ООО "ВиАТорг"
г. Белгород
ПРОДУКЦИЯ
Cосуды Дьюара криобиологические
КОНТАКТЫ
Связь с нами

ПРОДУКЦИЯ
Cосуды криобиологические (Сосуды Дьюара)



КОНТАКТЫ
ООО "ВиАТорг", г. Белгород
Компания "ВиАТорг" официальный представитель Харьковского завода транспортного оборудования в России поставляет криобиологические сосуды (Сосуды Дьюара) по России и странам СНГ.
У нас Вы можете купить Сосуды Дьюара недорого

E-mail:viatorg@yandex.ru

СТАТЬИ
Биотехнологии, принципы и применение


Партнеры
Объявления


Популярное
Интересные факты криобиологии
Хлорпроизводные углеводородов
С-1- и С-2-хлорпроизводные углеводородов широко использу­ются в качестве растворителей и представляют собой важный фактор загрязнения окружающей среды. Тем не менее о мик­робной деградации этих соедин ...

Системы скрещивания у грибов
У грибов существуют разнообразные типы скрещивания, кото­рые используются в генетических исследованиях. Многие гри-бы-аскомицеты и базидиомицеты обладают сложноорганизованными системами скрещивания, п ...

Грибной белок (микопротеин)
Микопротеин — это пищевой продукт, состоящий в основном из мицелия гриба. При его производстве используется штамм Fusarium gratninearum, выделенный из почвы. И процесс, и про­дукт — это ре ...

Вино
Необходимое условие любого спиртового бродильного процес­са — наличие сахара в сырье. Так, в производстве вина исполь­зуется сахар виноградного сока. Почти все вино в мире делают из винограда од ...

Фермер - предшественник современных биотехнологов
Зрелище возделанных полей стало для нас настолько привычно, что мы не замечаем искусственности такого пейзажа. Между тем очевидно, что деятельность живущих на Земле людей очень сильно сказывается на е ...

Металлы и камни
Строгих доказательств связи между активностью определенных микроорганизмов и процессами коррозии не существует. Воз­можны три механизма коррозии: образование корродирующих веществ (кислоты, сероводоро ...

Молочные продукты
В пищевой промышленности ферментацию применяют главным образом для получения молочных продуктов. В сквашивании мо­лока обычно принимают участие стрептококки и молочнокислые бактерии; лактоза при этом ...

Перспективы развития
В будущем влияние биотехнологии на развитие химической про­мышленности будет определяться возможностью объединения; принципов микробиологии, биохимии и химической технологии. Основной предпосылкой исп ...

Этиловый спирт
Производство этилового спирта при помощи дрожжей основана на давно устоявшейся технологии. Для полу­чения топливного спирта необходимо осуществить ряд процес­сов (рис. 2.5): подготовить сырье, провест ...

Опыты по генетической инженерии in vitro
Для получения разнообразных белков эукариот и вирусов Животных широко применяются бактерии и дрожжи Saccharo-myces cerevisiae. При этом используются самые разные методы, нр наиболее широко, те из дих, ...

Слияние протопластов
С целью преодоления преград для генетического обмена, су­ществующих в обычных системах скрещивания, был разработан метод слияния протопластов (клеток с удаленными клеточны­ми оболочками). Этот метод п ...

Эффективность фотосинтеза
Эффективность фотосинтеза с точки зрения производства био­массы можно оценить через долю общей солнечной радиации, попадающей на определенную площадь за определенное время, которая запасается в органи ...

Внутри- и внеклеточное накопление металлов микроорганизмами
О прямом накоплении металлов микроорганизмами уже шла речь в предыдущих разделах. Теперь мы рассмотрим лежащие .в основе этого явления биохимические процессы и возможности их использования в прикладно ...

Ближайшие перспективы
По оценкам примерно 15% реализуемой продукции пищевой промышленности вырабатывается на основе биотехнологии, но влияние ее на эту промышленность сегодня не больше, чем 25 лет назад (Tonge, Jarman, 198 ...

Биологический контроль за системами микробиологической переработки отходов
Основным условием применения биологической переработки сточных вод является постоянный контроль за возможным ток­сическим действием на установку со стороны поступающих сто­ков, с тем чтобы предотврати ...

Электроэнергия
Одним из интересных аспектов общей проблемы улавливания солнечной энергии является использование компонентов биоло­гических мембран для генерации электропотенциалов. Таким путем можно попытаться созда ...

Корончатые галлы и борьба с ними
Природа заболеванияНекоторые разновидности почвенной бактерии Agrobacterium tumefaciens способны внедряться в ткани двудольных растений через раневые поверхности и вызывать образование опухолей &mdash ...

Коммерческие аспекты применения ферментов
Применение ферментов в химической технологии обычно бывает обусловлено их высокой избирательностью и стереоспецифичностью, однако, как отмечалось ранее, эти их свойства не всегда оказываются желательн ...

Поглощение некоторых металлов дрожжами и бактериями
Микроорганизмы способны концентрировать металлы одним из следующих способов: 1) внеклеточное накопление участву­ющих или не участвующих в метаболизме металлов путем свя­зывания или осаждения их на ...

Популярность биотехнологии
Хотя популярность биотехнологии обусловлена главным об­разом использованием технологии рекомбинантных ДНК, нуж­но подчеркнуть, что и в других областях науки был сделан ряд крупных открытий, повлиявших ...


Плазмиды
Биотехнологии » Генетика и биотехнология


Многие свойства бактерий, интересные с точки зрения биотех­нологии, кодируются плазмидами. Плазмиды — это кольцевые молекулы ДНК, которые стабильно передаются потомству бак­териальных клеток независимо от хромосомной ДНК- В гене­тической инженерии плазмиды используются для клонирования нужных генов. Мы опишем в этом разделе некоторые важней­шие свойства, плазмид и обсудим те из них, котор,ые особенно ценны для биотехнологии.
Структура и репликация
Мол. масса плазмид составляет от 1*106 до 200*106. Таким об­разом, самые мелкие плазмиды кодируют один-два белка сред­него размера, тогда как более крупные — 300 или более бел­ков. Крупные плазмиды могут кодировать множество ферментов, необходимых для работы целой последовательности биохи­мических реакций, например для превращения толуола в катехол. Плазмиды с мол. массой более 100-106 обнаружены толь­ко у грамотрицательных бактерий, в частности у видов Pseudo-monas и Agrobacterium. Мол. масса плазмид грамположительных бактерий лишь в отдельных случаях превышает 40-106.
В. бактериальных клетках плазмиды существуют в виде кольцевых двухцепочечных ДНК, которые, кроме того, находят­ся в сверхспиральном состоянии. Некоторые из плазмид могут существовать лишь в клетках одного или двух близких видов. К числу плазмид с широким кругом хозяев относятся RP4, R68.45, RK2 и сходные с ними плазмиды, несущие маркер ус­тойчивости к лекарственным препаратам (R-плазмиды), кото­рые принадлежат Р-группе несовместимости (члены одной и той же группы несовместимости не могут сосуществовать в бак­териальной клетке). Эти плазмиды были перенесены во многие виды грамотрицательных бактерий; создается впечатление, что их хозяевами могут быть все штаммы грамотрицательных бак­терий.
Таким образом, R-плазмиды, относящиеся к группе Р, осо­бенно подходят для генетических экспериментов с грамотрицательными бактериями, используемыми в промышленности. При помощи этих плазмид мы можем осуществлять перенос хромо­сомных генов между неродственными видами. Небольшие по размеру производные плазмид RP4 и RK2 используются как векторы для клонирования молекул ДНК, которая затем мо­жет быть перенесена в клетки самых разных видов.
 Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl

Рис. 7.3. Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl. [J. G. Sutcliffe (1979) Cold Spring Harbor Simposia on Quanti­tative Biology, 43, 77—90.] Плазмида pMBl сходна с плазмидой ColEl. Устой­чивость к ампициллину определяется геном В-лактамазы. Указано направление транскрипции этого гена. Стрелками отмечены уникальные сайты расщепления pBR322 некоторыми ферментами.
 
Репликация некоторых типов плазмид тщательно изучена, и нам известны сегодня многие детали этого процесса, особен­но для небольшой плазмиды ColEl. Эта информация помогает при использовании плазмид для клонирования генов. Чаще все­го применяют производные плазмиды pBR322 длиной 4362 пар нуклеотидов, несущей гены устойчивости к пенициллину и тет­рациклину. Эти гены были перенесены из R-плазмид (рис. 7.3) в фрагмент небольшой плазмиды рМВ1, которая близка кочень хорошо изученной небольшой плазмиде ColEl.
Плазмиды pBR322 и ColEl могут реплицироваться в Е. со-U и близких видах Enterobacteriaceae. В бактериальных клет­ках они представлены несколькими копиями; так,для ColEl чис­ло плазмидных копий на хромосому равно примерно 20, а для pBR322 — 40. Это обстоятельство очень важно для клонирова­ния. Чем больше число копий клонированного гена, тем выше выход кодируемого белка. Кроме того, многокопийные плазми­ды не так легко утрачиваются при культивировании. С другой; стороны, малое число копий плазмиды иногда имеет свои пре­имущества, например при клонировании таких генов, продукты которых гибельны для бактериальной клетки в большом коли­честве.
Изучению механизмов контроля репликации и числа копий бактериальных плазмид посвящено множество работ. Было обнаружено, что число копий плазмид примерно одинаково в-клетках, размножающихся с разной скоростью. Из этого сле­дует, что репликация плазмид как-то связана с ростом бакте­рий. Такая координация достигается при участии механизмов,, контролирующих начало репликации. Если уж репликация на­чалась, то она идет с относительно постоянной скоростью при; любом темпе размножения бактерий. При высокой скорости размножения репликация индуцируется чаще в случае много-копийных плазмад, чем малокопийных.
Начало репликации ColEl и pBR322 контролируется неболь­шими молекулами РНК, которые взаимодействуют с особым участком плазмиды, расположенным поблизости от точки ини­циации репликации. Начавшись, репликация идет в одном нап­равлении и заканчивается вблизи точки инициации. Генетики,, стремящиеся максимально увеличить выход белков, кодируе­мых клонированными в pBR322 генами, получали мутанты с модифицированными РНК. У некоторых таких мутантов числа копий плазмиды составляет более 100, что приводит к суще­ственному увеличению выхода продуктов, кодируемых клониро­ванными генами. Интересная особенность репликации ColEl и pBR322 заключается в том, что она полностью обеспечива­ется ферментами хозяина. Сами плазмиды не несут информа­ции, нужной для кодирования ферментов репликации.
Процессы репликации pBR322 и ColEl, с одной стороны, и хромосомы Е. coli — с другой, различаются тем, что первый не подавляется хлорамфениколом, который блокирует синтез бел­ка. В присутствии этого соединения репликация хромосом пре­кращается по завершении уже начавшегося раунда реплика­ции. Такого подавления репликации pBR322 не происходит, и; плазмиды накапливаются в обработанных хлорамфениколом;
клетках, так что в конечном счете они составляют до 50% всей ДНК- При выделении плазмид для увеличения выхода плаз-мидной ДНК к культуре за несколько часов до сбора клеток иногда добавляют хлорамфеникол.
Инициация репликации плазмиды Rl E. coli регулируется белком-репрессором, кодируемым одним из генов R1. Были по­лучены мутантные плазмиды, которые кодируют аномальный репрессор или же имеют несовершенный механизм-регуляции его образования. Некоторые из этих мутантов -т— температуро-чувствительные (репрессор неактивен при 43 °С). При 30 °С репликация идет нормально, и на клетку образуется 1—2 плаз-мидные копии, а при 43 °С репликация инициируется гораздо чаще, так что в клетке накапливается по нескольку сот плаз­мид. Небольшой сегмент R1, содержащий участок начала реп­ликации и связанные с ними регулирующие элементы, был ис­пользован для создания плазмид-векторов, применяемых при клонировании разнообразных генов. -Преимущество таких век­торов заключается в том, что при повышенной температуре с их помощью можно получать множества копий клонируемого гена, а следовательно, и много белка, кодируемого этим геном.



Другие новости по теме:

  • Транспозоны
  • Включение ДНК в плазмидные и фаговые векторы
  • Важнейшие гены плазмид
  • Гибридизация путем скрещивания
  • Опыты по генетической инженерии in vitro


  •  (голосов: 0)

    ООО "ВиАТорг" © 2009
    Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru