О КОМПАНИИ
ООО "ВиАТорг"
г. Белгород
ПРОДУКЦИЯ
Cосуды Дьюара криобиологические
КОНТАКТЫ
Связь с нами

ПРОДУКЦИЯ
Cосуды криобиологические (Сосуды Дьюара)



КОНТАКТЫ
ООО "ВиАТорг", г. Белгород
Компания "ВиАТорг" официальный представитель Харьковского завода транспортного оборудования в России поставляет криобиологические сосуды (Сосуды Дьюара) по России и странам СНГ.
У нас Вы можете купить Сосуды Дьюара недорого

E-mail:viatorg@yandex.ru

СТАТЬИ
Биотехнологии, принципы и применение


Партнеры
Объявления


Популярное
Интересные факты криобиологии
Чановое выщелачивание
Чановое выщелачивание используется в горнорудной про­мышленности для извлечения урана, золота, серебра и меди из окисных руд. Медные и урановые руды сильно измельчают и смешивают с растворами серной к ...

Технология рекомбинантных ДНК (Инсулин)
Общеизвестно, что разработка методов изменения генетическо­го аппарата клеток, позволяющих вводить в них чужеродные гены, клонировать их, экспрессировать и получать нужные про­дукты, совершила настоящ ...

Микробное выщелачивание
Методы извлечения меди из пород, содержащих минералы, пу­тем обработки их кислыми растворами используются уже много веков. Однако лишь в 50-е и 60-е гг. нашего столетия выясни­лось, что в получении ме ...

Парасексуальный цикл у грибов
Многие мицелиальные формы грибов, применяющиеся в прот мьйиленности, не имеют истинного полового цикла, во времж которого можно было бы провести скрещивание с целью кон­струирования более продуктивных ...

Политран (склероглюкан)
Политран представляет собой линейный β-1,3-глюкан, выделяе­мый грибом Sclerotium glucanicum и близкими к нему видами при выращивании в глубинной культуре на среде с кукурузным экстрактом. К каждо ...

Сидр
Сброженный яблочный сок известен под названием сидр. В тех­нологии производства сидра и вина есть много сходного. Когда делают сидр, яблоки прежде всего измельчают в ка­шицу и отжимают сок. Для этого ...

Слияние протопластов
С целью преодоления преград для генетического обмена, су­ществующих в обычных системах скрещивания, был разработан метод слияния протопластов (клеток с удаленными клеточны­ми оболочками). Этот метод п ...

Сброженная пахта
Сброженный продукт получают из свежей пахты, а чаще из снятого молока путем добавления закваски, используемой при производстве масла. Эта закваска представляет собой смесь молочнокислых стрептококков ...

Инженерия белка
Белковая инженерия может быть основана на химической мо­дификации готового белка или на методах генетической инже­нерии, позволяющих получать модифицированные варианты природных белков.

Современные инокуляты на твердых носителях
Rhizobium, выращенные на агаре или в жидкой среде, после высушивания на поверхности семян быстро погибают, да и са­ми культуры их нежизнестойки. Этих недостатков лишены ино­куляты на торфяной основе, ...

Ферментация
Получение метана (биогаза) методом анаэробной переработки сырья и производство этилового технического спирта путем сбраживания при участии дрожжей — два главных примера био­логических технологий ...

Диагностика злокачественных новообразований и наблюдение за ними
Известны несколько специфических опухолевых маркеров, ко­торые с успехом используются в диагностике, прогнозировании и выявлении распространения опухолей (т. е. метастазов). Не­которые из них обнаружи ...

Логика развития биотехнологии
Механизмы развития биотехнологии заметно различаются в разных частях света и зависят от политических и экономических факторов, характерных для Запада и Востока, Севера и Юга, стран третьего мира и раз ...

Инокуляция бактериями Rhizobium
Наиболее простой способ инокуляции основан на использовании почвы, взятой с полей, где выбранная для выращивания куль­тура бобовых растет хорошо. Этот способ вполне пригоден и широко применялся в конц ...

Биодеградация ксенобиотиков в окружающей среде
Биодеградация органических соединений, загрязняющих окру­жающую среду, оправдана только в том случае, если в резуль­тате происходит их полная минерализация, разрушение и детоксикация если же биохимиче ...

Аэробная переработка отходов в сельском хозяйстве
Если сельское хозяйство ведется традиционными способами, то отходов животноводства образуется немного, и их несложно' использовать для удобрения ^расположенных поблизости пахот­ных земель. Сегодня, к ...

Консервированные овощи
Как и в случае многих других разновидностей пищевого сырья, необходимость сохранения овощей для употребления их в тече­ние всего года привела к созданию ряда новых пищевых про­дуктов. До того как в пр ...

ЛИТЕРАТУРА
Barnard G. W. (1983). Liquid Fuel Production from Biomass in the developing-countries: An Agricultural and Economic Perspective. In: Bioconversion Sys­tems (ed. Wise D. L.), pp. 112—268, CRC Pre ...

Интенсификация фотосинтеза методами биотехнологии
Увеличение выхода биомассы за год в существующих сегодня системах растениеводства может быть достигнуто двумя путя­ми: во-первых, за счет увеличения скорости фотосинтеза до пределов, возможных в оптим ...

Перспективы развития
В будущем влияние биотехнологии на развитие химической про­мышленности будет определяться возможностью объединения; принципов микробиологии, биохимии и химической технологии. Основной предпосылкой исп ...


Плазмиды
Биотехнологии » Генетика и биотехнология


Многие свойства бактерий, интересные с точки зрения биотех­нологии, кодируются плазмидами. Плазмиды — это кольцевые молекулы ДНК, которые стабильно передаются потомству бак­териальных клеток независимо от хромосомной ДНК- В гене­тической инженерии плазмиды используются для клонирования нужных генов. Мы опишем в этом разделе некоторые важней­шие свойства, плазмид и обсудим те из них, котор,ые особенно ценны для биотехнологии.
Структура и репликация
Мол. масса плазмид составляет от 1*106 до 200*106. Таким об­разом, самые мелкие плазмиды кодируют один-два белка сред­него размера, тогда как более крупные — 300 или более бел­ков. Крупные плазмиды могут кодировать множество ферментов, необходимых для работы целой последовательности биохи­мических реакций, например для превращения толуола в катехол. Плазмиды с мол. массой более 100-106 обнаружены толь­ко у грамотрицательных бактерий, в частности у видов Pseudo-monas и Agrobacterium. Мол. масса плазмид грамположительных бактерий лишь в отдельных случаях превышает 40-106.
В. бактериальных клетках плазмиды существуют в виде кольцевых двухцепочечных ДНК, которые, кроме того, находят­ся в сверхспиральном состоянии. Некоторые из плазмид могут существовать лишь в клетках одного или двух близких видов. К числу плазмид с широким кругом хозяев относятся RP4, R68.45, RK2 и сходные с ними плазмиды, несущие маркер ус­тойчивости к лекарственным препаратам (R-плазмиды), кото­рые принадлежат Р-группе несовместимости (члены одной и той же группы несовместимости не могут сосуществовать в бак­териальной клетке). Эти плазмиды были перенесены во многие виды грамотрицательных бактерий; создается впечатление, что их хозяевами могут быть все штаммы грамотрицательных бак­терий.
Таким образом, R-плазмиды, относящиеся к группе Р, осо­бенно подходят для генетических экспериментов с грамотрицательными бактериями, используемыми в промышленности. При помощи этих плазмид мы можем осуществлять перенос хромо­сомных генов между неродственными видами. Небольшие по размеру производные плазмид RP4 и RK2 используются как векторы для клонирования молекул ДНК, которая затем мо­жет быть перенесена в клетки самых разных видов.
 Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl

Рис. 7.3. Плазмиду pBR322 получают путем объединения плазмид ТпЗ, pSClOl и pMBl. [J. G. Sutcliffe (1979) Cold Spring Harbor Simposia on Quanti­tative Biology, 43, 77—90.] Плазмида pMBl сходна с плазмидой ColEl. Устой­чивость к ампициллину определяется геном В-лактамазы. Указано направление транскрипции этого гена. Стрелками отмечены уникальные сайты расщепления pBR322 некоторыми ферментами.
 
Репликация некоторых типов плазмид тщательно изучена, и нам известны сегодня многие детали этого процесса, особен­но для небольшой плазмиды ColEl. Эта информация помогает при использовании плазмид для клонирования генов. Чаще все­го применяют производные плазмиды pBR322 длиной 4362 пар нуклеотидов, несущей гены устойчивости к пенициллину и тет­рациклину. Эти гены были перенесены из R-плазмид (рис. 7.3) в фрагмент небольшой плазмиды рМВ1, которая близка кочень хорошо изученной небольшой плазмиде ColEl.
Плазмиды pBR322 и ColEl могут реплицироваться в Е. со-U и близких видах Enterobacteriaceae. В бактериальных клет­ках они представлены несколькими копиями; так,для ColEl чис­ло плазмидных копий на хромосому равно примерно 20, а для pBR322 — 40. Это обстоятельство очень важно для клонирова­ния. Чем больше число копий клонированного гена, тем выше выход кодируемого белка. Кроме того, многокопийные плазми­ды не так легко утрачиваются при культивировании. С другой; стороны, малое число копий плазмиды иногда имеет свои пре­имущества, например при клонировании таких генов, продукты которых гибельны для бактериальной клетки в большом коли­честве.
Изучению механизмов контроля репликации и числа копий бактериальных плазмид посвящено множество работ. Было обнаружено, что число копий плазмид примерно одинаково в-клетках, размножающихся с разной скоростью. Из этого сле­дует, что репликация плазмид как-то связана с ростом бакте­рий. Такая координация достигается при участии механизмов,, контролирующих начало репликации. Если уж репликация на­чалась, то она идет с относительно постоянной скоростью при; любом темпе размножения бактерий. При высокой скорости размножения репликация индуцируется чаще в случае много-копийных плазмад, чем малокопийных.
Начало репликации ColEl и pBR322 контролируется неболь­шими молекулами РНК, которые взаимодействуют с особым участком плазмиды, расположенным поблизости от точки ини­циации репликации. Начавшись, репликация идет в одном нап­равлении и заканчивается вблизи точки инициации. Генетики,, стремящиеся максимально увеличить выход белков, кодируе­мых клонированными в pBR322 генами, получали мутанты с модифицированными РНК. У некоторых таких мутантов числа копий плазмиды составляет более 100, что приводит к суще­ственному увеличению выхода продуктов, кодируемых клониро­ванными генами. Интересная особенность репликации ColEl и pBR322 заключается в том, что она полностью обеспечива­ется ферментами хозяина. Сами плазмиды не несут информа­ции, нужной для кодирования ферментов репликации.
Процессы репликации pBR322 и ColEl, с одной стороны, и хромосомы Е. coli — с другой, различаются тем, что первый не подавляется хлорамфениколом, который блокирует синтез бел­ка. В присутствии этого соединения репликация хромосом пре­кращается по завершении уже начавшегося раунда реплика­ции. Такого подавления репликации pBR322 не происходит, и; плазмиды накапливаются в обработанных хлорамфениколом;
клетках, так что в конечном счете они составляют до 50% всей ДНК- При выделении плазмид для увеличения выхода плаз-мидной ДНК к культуре за несколько часов до сбора клеток иногда добавляют хлорамфеникол.
Инициация репликации плазмиды Rl E. coli регулируется белком-репрессором, кодируемым одним из генов R1. Были по­лучены мутантные плазмиды, которые кодируют аномальный репрессор или же имеют несовершенный механизм-регуляции его образования. Некоторые из этих мутантов -т— температуро-чувствительные (репрессор неактивен при 43 °С). При 30 °С репликация идет нормально, и на клетку образуется 1—2 плаз-мидные копии, а при 43 °С репликация инициируется гораздо чаще, так что в клетке накапливается по нескольку сот плаз­мид. Небольшой сегмент R1, содержащий участок начала реп­ликации и связанные с ними регулирующие элементы, был ис­пользован для создания плазмид-векторов, применяемых при клонировании разнообразных генов. -Преимущество таких век­торов заключается в том, что при повышенной температуре с их помощью можно получать множества копий клонируемого гена, а следовательно, и много белка, кодируемого этим геном.



Другие новости по теме:

  • Транспозоны
  • Включение ДНК в плазмидные и фаговые векторы
  • Важнейшие гены плазмид
  • Гибридизация путем скрещивания
  • Опыты по генетической инженерии in vitro


  •  (голосов: 0)

    ООО "ВиАТорг" © 2009
    Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru