О КОМПАНИИ
ООО "ВиАТорг"
г. Белгород
ПРОДУКЦИЯ
Cосуды Дьюара криобиологические
КОНТАКТЫ
Связь с нами

ПРОДУКЦИЯ
Cосуды криобиологические (Сосуды Дьюара)



КОНТАКТЫ
ООО "ВиАТорг", г. Белгород
Компания "ВиАТорг" официальный представитель Харьковского завода транспортного оборудования в России поставляет криобиологические сосуды (Сосуды Дьюара) по России и странам СНГ.
У нас Вы можете купить Сосуды Дьюара недорого

E-mail:viatorg@yandex.ru

СТАТЬИ
Биотехнологии, принципы и применение


Партнеры
Объявления


Популярное
Интересные факты криобиологии
ЛИТЕРАТУРА
Arima К.. (1977). Recent developments and future directions of fermentations In Japan, Devs ind. Microbiol., 18, 78 — 117. Aunstrup K.. (1979). Production of extracellular enzymes. In: Applied B ...

Продукты гидролиза крахмала
Крахмал трех основных поступающих на рынок сортов получа­ют по обычной технологии. Способы производства кукурузного, пшеничного и картофельного крахмала были неоднократно и подробно описаны (см. разд. ...

Химические вещества, получаемые из биомассы
Известно, что после окончания второй мировой войны химиче­ская промышленность получала из природного газа и нефти разнообразные виды сырья высокой чистоты в большом коли­честве и по относительно стаби ...

Контроль за патогенностью
Одно из основных достоинств процесса микробного анаэробно­го разложения состоит в элиминации с его помощью патоген­ных микроорганизмов, в особенности агентов, вызывающих порчу пищи (главные образом Sa ...

Недостатки метода бактериального выщелачивания
В предыдущих разделах в общих чертах говорилось о практи­ческом использовании бактериального выщелачивания в настоя­щее время и в перспективе. Однако немедленное практическое применение бактериального ...

Водоросли и водные растения
Потенциальный урожай биомассы у пресноводных и морских растений весьма велик, но чрезвычайно большое содержание воды во многих этих растениях при сборе и сложность сушки на солнце препятствуют использ ...

Системы скрещивания у грибов
У грибов существуют разнообразные типы скрещивания, кото­рые используются в генетических исследованиях. Многие гри-бы-аскомицеты и базидиомицеты обладают сложноорганизованными системами скрещивания, п ...

Сметана
Ее готовят почти так же, как сброженную пахту. К сливкам добавляют 0,5—1% закваски, используемой при производстве масла. Далее продукт выдерживают, пока концентрация кисло­ты не достигнет 0,6%.Н ...

Улучшение симбиоза между бобовыми и Rhizobium
Симбиотические отношения, приводящие к фиксации азота,— это наиболее эффективный способ биологического образования аммиака, потребляемого сельскохозяйственными культурами. Влияя на них, мы сможе ...

Микробные полисахариды: свойства, применение и коммерческая ценность
Ксантан   [келтрол   (Keltrol),   келзан   (Kelzan),   Родогель (Rhodogel)] Ксантан синтезируется Xanthomonas campestris при росте на глюкозе, сахарозе, крахмале, кукурузной декстрозе и барде. В качес ...

Реакции прямого окисления и оксигенации
Для преобразования сложных молекул в ходе органического синтеза используются оксидоредуктазы со строгой структурной, сайт- и стереоспецифичностью. В случае более широкой суб­стратной специфичности эти ...

Ферменты
Ферменты составляют основу многих тестов, используемых в клинической медицине. Они все чаще применяются при авто­матизированном анализе и биохимическом скрининге жидко­стей тела, которые ведутся в био ...

Поверхностные покрытия
Поверхностные покрытия (краски, различные типы лаков) иг­рают двоякую роль: они выполняют декоративную функцию и защищают покрываемую поверхность от вредных воздействий среды, в том числе и от микроор ...

Внеклеточное комплексообразование
Некоторые микроорганизмы синтезируют специфические хими­ческие соединения, обладающие высоким сродством к опреде­ленным металлам. Наиболее известны соединения, образующие-комплексы с железом. Молибден ...

Занфло (Zanflo)
Полисахарид занфло, получаемый из Erwinia tahitica, облада­ет сходными с ксантаном свойствами; единственное отличие со­стоит в том, что его вязкость претерпевает обратимые термиче­ские изменения (при ...

Фермер - предшественник современных биотехнологов
Зрелище возделанных полей стало для нас настолько привычно, что мы не замечаем искусственности такого пейзажа. Между тем очевидно, что деятельность живущих на Земле людей очень сильно сказывается на е ...

Активный ил
Переработка отходов с помощью активного ила, осуществляе­мая сложной смесью микроорганизмов, была предложена в 1914 г. Этот процесс более эффективен, чем фильтрация, и по­зволяет перерабатывать сточны ...

Другие замещенные простые ароматические соединения
При деградации арилгалогенов замещающие группы часто от­щепляются на последних этапах катаболизма после разруше­ния ароматических колец системы. В случае сульфонированных ароматических соединений связ ...

Инокуляция семян
Суть этого метода заключается в том, что на семена наносят большое число клеток Rizobium, соответствующих определенно­му виду растения-хозяина, что увеличивает вероятность быстро­го образования клубен ...

Производство аминокислот при помощи бактерий и их мутантов
Все аминокислоты, из которых состоят белки, являются-L-a-амино- (или имино-) кислотами. Они находят применение-как пищевые добавки, приправы, усилители вкуса, как сырье в парфюмерной и фармацевтическо ...


Трансформация
Биотехнологии » Генетика и биотехнология


Полученные in vitro рекомбинантные плазмиды необходимо пе­ренести в подходящую клетку-хозяина, природа которой и оп­ределяет особенности способа трансформации. Так, клетки Е. coli становятся компетентными, (т. е- способными захваты­вать очищенную ДНК) после обработки их на холоду СаСl2, а клетки Bacillus subtilis приобретают компетентность на опре­деленной фазе клеточного цикла при их разовом культивирова­нии в условиях дефицита питательных веществ. Многие дру­гие бактерии, включая виды Streptomyces, можно трансформи­ровать только в форме протопластов, когда удалены клеточные стенки. Для облегчения проникновения ДНК в дрожжевые клетки после обработки их СаСl2 или ПЭГ из этих клеток так­же часто получают протопласты. Интактные, дрожжевые клет­ки становятся компетентными после обработки ионами щелоч­ных металлов, например Li+.
 
Экспрессия клонированных генов
 
Цель многих опытов по клонированию состоит в наработке в большом количестве какого-либо белка эукариот. Именно для этого:и встраивают гены эукариот в плазмиды бактерий. Что­бы достичь высокого уровня экспрессии гена, эукариотическую ДНК нужно встроить вблизи от активного промотора транскрипции; образующаяся мРНК при этом должна эффективно транслироваться. Промоторы, использующиеся для обеспечения активной экспрессии, обычно не принадлежат к числу изна­чально присутствующих в плазмйдах. Как правило, это бывают промоторы фаговых или хромосомных генов, включаемые в ялазмидные векторы. Типичным примером такого рода служит промотор PL бактериофага γ. ДНК с таким промотором эффек­тивно транскрибируется, и образуется большое количество-мРНК. Контроль за работой PL осуществляется белком-репрессором, продуктом гена C1 этого бактериофага. Ген C1857 кодиру­ет температурочувствительный белок-репрессор, который акти­вен при 30°С, но не работает при 42°С. Если внести этот ген в составе плазмиды или фага в ту же клетку, что и промотор- PL, то экспрессию клонированных генов, контролируемую  PL, можно регулировать, изменяя температуру.
У дрожжей Saccharomyces cerevisiae векторы с высоким уровнем экспрессии конструируют на основе промоторов генов, которые кодируют важнейшие клеточные белки (например, ал-когольдегидрогеназу и фосфоглицераткиназу). Так, с помощью-промотора алкогольдегидрогеназы С1 удалось добиться прямой транскрипции в дрожжах гена инсулина человека, а в опытах с использованием промотора фосфоглицераткиназы получен высокий уровень экспрессии генов интерферонов.
С помощью бактерий были получены с высоким выходом не­которые белки — продУкты генов животных и их вирусов. Так, были созданы штаммы Е. coli, у которых 20% всего клеточно­го белка составляли коровый антиген вируса гепатита В, гор­мон роста человека или главный капсидный антиген вируса ящура. У одного из сконструированных штаммов В. sub tills последний составлял около 1 % синтезируемого этой бактерией белка. Однако добиться экспрессии в бактериальных клетках генов некоторых белков животных или их вирусов совсем не­просто, даже если эти гены сопряжены с сигналами инициации транскрипции и трансляции, которые обеспечивают в норме высокий уровень экспрессии генов прокариот. Причины такой неэффективной экспрессии не всегда ясны, но в некоторых слу­чаях удалось установить, что протеазы бактерий быстро разру­шают белки животных и вирусов. В подобных ситуациях мож­но повысить выход, применяя несодержащие протеаз мутанты. При выработке проинсулина, предшественника инсулина, неко­торая защита от протеаз обеспечивается тем, что полипептид, секрётируется в периплазматичёское пространство у клеточной стенки Е. coli. На N-конце молекулы препроинсулина нахо­дится последовательность гидрофобных аминокислот, с по­мощью которой (с одновременным ,ее отщеплением) осуществ­ляется транспорт этой молекулы через мембрану в периплаз-
матическое пространство. Время   полужизни   проинсулина в клетке 2 мин, а в периплазматическом пространстве 20 мин.
Другой способ получения чувствительных к протеазам бел­ков основан на выделении их бактериями Bacillus в окружаю­щую среду. Эти бациллы в отличие от Е. coli способны экскре-тировать некоторые белки. Так, получены штаммы Bacillus, осуществляющие экскрецию проинсулина. Выделенный в среду «белок обычно проще очищать, чем внутриклеточный. Помимо этого, использование штаммов Bacillus имеет то преимущество, что они не образуют эндотоксинов. Выяснилось, однако, что клетки Bacillus эффективно экскретируют, видимо, лишь неко­торые типы полипептидов. В опытах с дрожжами проблема сек­реции была решена путем создания векторов, содержащих сиг­нальные последовательности генов а-фактора гормона спарива­ния или токсина-«убийцы».



Другие новости по теме:

  • Опыты по генетической инженерии in vitro
  • Прикладные аспекты генетической инженерии
  • Гибридизация путем скрещивания
  • Транспозоны
  • Плазмиды


  •  (голосов: 0)

    ООО "ВиАТорг" © 2009
    Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru