Криобиологические сосуды > Генетика и биотехнология > Слияние протопластов

Слияние протопластов


С целью преодоления преград для генетического обмена, су­ществующих в обычных системах скрещивания, был разработан метод слияния протопластов (клеток с удаленными клеточны­ми оболочками). Этот метод пригоден для получения межвидо­вых и даже межродовых гибридов. Его можно использовать при гибридизации клеток одного вида, которые принадлежат к несовместимым группам спаривания или же когда природная система скрещивания малоэффективна в плане образования ге­нетических рекомбинантов.
Слияние протопластов бактерий
Метод слияния протопластов был впервые использован в опы­тах с бактериями для получения межвидовых гибридов Bacillus imegaterium X.Bacillus subtllis. В природе эти бактерии не
конъюгируют, но легко трансформируются изолированной ДНК. Путем слияния протопластов, индуцируемого либо поли-этиленгликолем, либо СаСЬ, получить их гибриды несложно. При этом частота рекомбинации может достигать 10-5—10-4  процесс нечувствителен к ДНКазе, следовательно, он осу­ществляется без трансформации.
Этот метод нашел широкое применение при гибридизации видов Streptomyces. Так, Streptomyces coelicolor обладает плаз-мидозависимой системой фертильности или скрещивания, однако эта система малоэффективна, а многие исполь­зуемые в промышленности виды Streptomyces вообще не спо­собны к обычному скрещиванию. Если же применить метод слияния протопластов, индуцируемого полиэтиленгликолем, то частоту рекомбинации удается повысить примерно на четыре порядка по сравнению с наблюдаемой при обычном скрещива­нии. Максимальная частота рекомбинации, достижимая при ра­боте этим методом, составляет 10—20%. Штаммы не обяза­тельно должны нести селективные генетические маркеры, по­скольку при использовании этого метода возможен прямой от­бор гибридов с нужным свойством. Это дает большие преиму­щества при конструировании промышленно важных штаммов, поскольку работа по введению подходящих маркеров нередко превращается в утомительное трудоемкое занятие.