Криобиологические сосуды > Генетика и биотехнология > Слияние клеток животных

Слияние клеток животных


Осуществить слияние клеток и получить внутри- или межви­довые гибриды клеток млекопитающих методически проще, чем в случае микроорганизмов или растений, так как клетки млеко­питающих не имеют клеточной стенки, которую необходимо-удалять перед слиянием. Первый метод контролируемого слия­ния клеток млекопитающих был основан на использовании ин-активированного вируса Сендай. Этот вирус относится к группе парамиксовирусов; его вирион покрыт липидсодержащей обо­лочкой, сливающейся с мембраной клетки-хозяина и обеспечи­вающей проникновение вируса в клетку. Вирус способствует слиянию, связываясь одновременно с мембранами двух клеток. В опытах по слиянию клеток млекопитающих используются также некоторые химические вещества (ионы кальция, лизолецитин, ПЭГ).
Отбор гибридов из смеси продуктов слияния лучше всего» вести в селективных условиях, хотя для этого можно использо­вать и трудоемкий метод скрининга. Так, отбор может происхо­дить в результате комплементации ауксотрофных и температу-рочувствительных мутаций, но чаще всего для этого использу­ются маркеры устойчивости к химическим веществам. Послед­ний метод был предложен Литтлфилдом, который провел опы­ты по слиянию устойчивой к бромдезоксиуридину лини» (BUdRr) L-клеток мыши и еще одной линии, устойчивой к азагуанину (AGr). В клетках BUdRr отсутствует фермент тимидин-киназа (ТК), а в клетках AGr — инозинпирофосфорилаза (IPP). Ни клетки ТК-IРР+, ни клетки TK+IPP- не растут на среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Ами-ноптерин ингибирует биосинтез нуклеотидов; трифосфаты пури-новых и пиримидиновых нуклеозидов могут синтезироваться только клетками, способными использовать и тимидин, и гипо­ксантин. Для жизнедеятельности этим клеткам необходимы ак­тивные ферменты ТК и IPP. Таким образом, среди продуктов, слияния TK+IPP-, TK-IPP+ и TK+IPP+ способностью к росту, будут обладать лишь клетки, у которых активны оба фермента.
Использование таких приемов отбора позволило получить гибриды не только путем слияния линий клеток одного вида, но и межродовые гибриды клеток человека с клетками мыши я крысы. Эти линии клеток грызунов/человека нестабильны, -причем легче они теряют хромосомы человека, так что после тридцати делений в процессе выращивания у них остается все-то семь из 24 хромосом человека, изначально присутствовавших в гибридной клетке. Этот процесс элиминации хромосом был применен при картировании генома человека, поскольку та­ким путем удается быстро локализовать определенные гены на хромосомах.